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    技術文章

    薄層板的制備及應用中的問題


    薄層板的制備及應用中的問題
    關于配制CMC-Na
      先將稱好的CMC-Na加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,再加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時間短.溶液的濃度0.3-0.7%比較合適,實際操作中0.4%~0.5%*為實用,濃度高了將來顯色時如果有加熱過程稍不小心板子容易發黑,濃度低了鋪出來的板子不結實,輕輕一碰就掉渣,不好保存,而且點樣時會很緊張,容易出洞.0.5%CMC-Na與水溶漲至充分,攪拌溶漲,如果不好溶漲,可在溶漲前加幾滴乙醇,比較好溶,但是盡量不加,因為加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。需注意:
    1)CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兌,否則,幾天以后就會變綠,起霉。注意放置時間太長的CMC-Na溶液可能會發黃,而且可能有霉菌出現,**不能再使用。
    2)如果有抽濾裝置可以直接把CMC-Na溶液濾過,就可以不必等它沉淀再取上清液了(還有兩個好處一是節省CMC-Na溶液,二是抽濾過的CMC-Na溶液的時候不必擔心會把下層的不溶物倒出來了?。?。有個辦法過濾CMC-Na溶液,就是在布氏漏斗上平鋪薄薄的一層脫脂棉,用蒸餾水潤濕脫脂棉,啟動真空泵,抽緊后就可以放心大膽的倒CMC-Na溶液了,保證濾過的溶液澄清透明,而且長時間放置不沉淀。 
    3)CMC-Na是一種高分子材料,而高分子材料的溶解必然都會有一個溶漲、溶解的過程,所以配制的時候,應該將稱好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開平鋪,這樣能夠充分浸潤,使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內加熱溶解,當然如果不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計十天半月的也可以用了.
    在CMC-Na的溶解過程中,也可以使用可進行加熱操作的磁力攪拌器,大概攪拌5小時,應該可得到滿意的效果。而且這樣就可以使CMC-Na溶解,并且溶液更澄清。CMC-Na的處理也可進行離心,5000rpm離心20min。倒出上清液,(非常清,也同時消除了過濾過程中可能發生的污染。)更難能可貴的是,可以收集下面沒有充分溶解的CMC-Na。繼續加到水中,還可以繼續配制。
    關于薄層板的要求:
    1.載板要求平滑清潔,沒有劃痕,在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌,再用水沖洗干凈。
    2.怎么樣的玻璃算是干凈:用洗潔精浸泡也好,用酸浸泡也好,當你覺得洗干凈的時候,拿在手上立起來,如果發現水不是呈股流下,而是呈瀑布狀態流下,那么說明你的玻璃板已經洗干凈了。其實真正洗干凈的玻璃,很快就可以晾干的。
    3.怎樣清洗用過后的薄層板:試著用了洗衣粉、洗潔精,反復洗了數遍,仍然掛水珠。鋪制薄層板要求玻璃板干凈、整潔、不掛水珠的。建議用洗液泡,如果還解決不了那就只好放棄這塊玻璃板了,有說可以用鹽酸的。
    關于研磨及鋪板要求:
    1.硅膠的研磨,當然是一個方向了,可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡,也可以適當攪拌后在干凈容器內超聲,效果都是不錯的。手工鋪硅膠的用量一般10*20的約3~4克,硅膠和CMC-Na的用量一般是1:2.8~3,具體根據要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
    2.依據薄層板使用需要,將適量研好的吸附劑倒到薄層板上,先用小錘將吸附劑蕩勻,傾斜薄層板,使吸附劑流至薄層板一側,待吸附劑蓄積一定量后,再反向傾斜薄層板,使吸附劑回流然后是另外兩個方向,重復操作,后輕顛幾下薄層板即可。
    3.將載玻片置于平臺上,用藥匙舀取糊狀硅膠,均勻地鋪在載玻片表面。鋪板時,可以順著板中間倒,也可以順著某個邊緣倒,也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上,倒時也要注意不要引入小氣泡。如有需要,可以雙手10個指頭托住玻璃板,有節奏的顛簸,使得糊狀硅膠分布勻稱。尤其是載板的四個角,容易高出玻璃板其他部位,所以要格外注意。顛好的板,表面看上去要光滑平整,沒有氣孔。薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上,否則難保證板面硅膠的厚度均勻。
    4.鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內用50度以下的溫度鼓風干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過快在使用的過程中有可能發生起層的現象不利于分離。
    關于裂板:
     板子會裂口,一則可能是因為硅膠的比例太大,二則可能是板子要在常溫下晾干后,才能在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下,裂口的幾率就比較高的。關于活化出現裂板、爆板的問題,我從沒有遇上過?;罨沂沁@樣處理的,不要等到溫度達到100度,而是設好溫度后就將板子放在干燥箱,然后再通電加熱,達到*高溫度后停留5分鐘左右即可。這樣水分是慢慢由內而外散發,而不是由外向內散發,避免了表面成膜,里面還在散發水氣,豈有不裂、不爆的道理!
    關于展開劑:
    分離的樣品酸性比較大,一般在展開劑中加酸。加甲酸是因為該樣品是酸性的,加酸的量和該物質的酸性成正比關系,加水可能是因為樣品是苷類的用酸水做一下緩沖,目的就是讓斑點圓滑,不脫尾,展距良好。飽和非常重要,邊緣效應很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙上,貼在展開缸的內壁,這樣飽和效果會好一些。
    1)在層析缸口涂適量凡士林,增加密封性;
    2)以展開劑邊緣效應的大小,確定展開劑平衡時間的長短,一般平衡時間在30分鐘即可。
    3)展開劑比如氯仿:甲醇:氨水(10:1:0.6),有機溶劑的極性,甲醇>氯仿,因此在這個展開劑中,如果極性略大,可適當降低甲醇比例;如極性太小,可適當增大甲醇比例。氯仿:甲醇:氨水10:1:0.6 和20:2:1.2極性肯定是相同的。另外還有一個問題,這個展開劑中,甲醇用量較小,而甲醇又易揮發,容易產生邊緣效應,要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。 不同的展開系統意思是其中至少應該有一種溶劑不同(*好是不同類組的溶劑),而不是比例不同?;蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ?。
    關于點樣:
    點樣管點樣時食指放在其上端,當點樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動上端的食指,溶液自然從點樣管出來,迅速提起點樣管,就這樣反復操作點出的斑點既小又均勻。但要提出樣品溶液不能太濃,濃度太大,點下的樣品不能被硅膠很好的吸收,不利于分離。
    便宜的進樣器(大約10幾塊錢吧,10μl即可),可將針尖打磨圓滑,用銼一點一點銼,這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行(甲醇溶液都這樣),并且針尖不會刺破已經鋪好的薄層板。當然,點樣的時候手不能抖動。動作要輕,這些要領在于意會,逐漸鍛煉。要磨平微量進樣器的針尖,簡單的方法就是,在展開缸的蓋子上輕磨(當然是靠近中間部分),就很快能解決問題,且很平滑。
    關于展開: 
    TLC中樣品拖尾現象是什么原因,該如何解決?TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點沒有清晰的分離,這是什么原因造成的,一般情況下該如何解決? 
    造成問題的原因基本相同: a、對于一些具有酸堿性的化學成分,在溶液中部分電離,事實上展開時存在分子、離子兩種狀態,以中性的有機試劑展開必然會出現兩種層析行為,造成脫尾甚至是一條線。b、展開劑選擇不當  c、點樣量過大。
    樣品超載解決辦法:a、在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸;  b、展開時以氨水飽和  c、減少點樣量d、參考文獻,調整展開劑種類比例  。
    二次展開是依據樣品定的,但肯定要在**次展開后,將板晾干或吹干,再放入另一種展開劑中展開,有的樣品二次展開還要換展開方向,和原方向垂直。所以要以實際分離樣品需要而定。一般是因為樣品成分多,極性差別大。
    關于顯色:
    在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種,但凡加了CMC-Na的板都易糊,尤其是溫度高于100度時,要嚴格控制加熱顯色的時間。后改用不加CMC-Na輔的水板來作,就不會有烘糊現象,故也可推論CMC-Na易于與硫酸起糊化反應。感覺輔水板關鍵是硅膠G與水的比例要達1:3.5左右,而且研磨后要盡快涂布,不然易于凝固而難于涂布。但不加CMC-Na輔的板又太軟,點樣時容易點出洞,有個好辦法是將CMC-Na的濃度調至0.1%,這樣就不易烘黑的。
    附:
    1. 吸附層析的基本原理是什么?
    吸附層析是將吸附劑涂布于玻璃板或金屬板上成為一薄層(0.25~1mm),待分離的試液點在薄層的一端,離邊緣一定距離處,然后在層析缸中用適宜的展開劑展開。由于吸附劑對不同物質具有不同的吸附能力,因此當展開劑流過時,不同物質就在吸附劑和展開劑之間發生連續不斷的吸附,解吸,再吸附,再解吸。吸附力強的物質相對地移動得慢些,吸附力較弱的物質則相對地移動得快些,這樣經適當時間后,試樣組分就彼此相互分離了。
    2. 薄層板的涂布要**什么,為什么要這樣做?
    首先制備薄層板所用的玻璃板必須表面光滑,潔凈不帶油膩,并晾干。然后在硅膠G中加入適量的蒸餾水研磨成均勻無氣泡的薄漿狀溶液,迅速倒在玻璃板上,隨即輕輕搖動玻板,把硅膠涂布均勻,使它無氣泡,并保持在水平位置上陰干,若涂布不均勻或有氣泡,待干燥后,就會產生高低不平,或在活化時氣泡破裂,形成小空洞,這樣都影響展開和分離。
    3. 薄層板為何要進行“活化”?
    吸附劑的活性和含水量有密切關系,含水較多,吸附能力就大為減弱,因此通??偘盐絼┰谝欢囟认潞嬉欢〞r間,以驅除水分,增強吸附能力,改善薄層板的分離效果,即所謂的“活化”。
    4. 點樣的要**什么,為什么要這樣做?
    點樣時用玻璃毛細管吸取試液適量,垂直地輕微接觸薄層板表面(注意防止損壞硅膠層)。樣品溶液擴展開來的斑點直徑應小于5mm,二相鄰斑點中心間距應大于15mm。若斑點易擴散,則可先點上少許試液,待斑點干后,再點**次,因為點樣斑點大,會引起分離后的斑點擴散,影響展開后的分離度。若二斑點中心間距太小,展開中可能產生相鄰斑點的相互重疊。點樣點的起始線應在距玻璃板底邊2cm處,防止因點樣太低而原點直接浸入展開劑中。點樣斑點離板邊距離應大于1.5cm,否則會因邊緣溶劑的揮發,使斑點隨之偏離而產生邊緣效應。
    5. 層析缸為何要先用展開劑飽和?
    若層析缸未先為展開劑飽和,則由于展開劑中各種溶劑的揮發度不同,在層析過程中,隨著展開劑的不斷揮發,會使缸內展開劑組成不斷改變,而使展開劑的極性發生改變,從而使各種組分的Rf值發生改變,分離受到影響。
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